Wie kann ADMA gemessen werden?

Die ersten Methoden zur Bestimmung von ADMA waren aufwändige chromatographische Verfahren (z.B. Hochdruck-Flüssigkeits-chromatographie (HPLC)), da man mit diesen Verfahren eine chemische Auftrennung der beiden strukturell sehr ähnlichen, jedoch in ihrer funktionellen Bedeutung sehr verschiedenen Isomere, ADMA und SDMA erreichen kann (Abbildung 19). Die Messung mittels HPLC hat jedoch den Nachteil, dass eine aufwändige, zeit- und personalintensive Probenvorbereitung notwendig ist, um die im menschlichen Plasma und Serum vorhandenen, winzigen Menge sicher quantifizieren zu können. So sind diese Methoden nur in wenigen Speziallabors verfügbar, in denen der Probendurchsatz meist auf ein bis zwei Dutzend Proben pro Tag begrenzt ist.



Abbildung 19. Auftrennung einer Humanplasma-Probe zur Quantifizierung von ADMA, SDMA und L-Arginin. L-Homoarginin wird der Probe als Standard zugegeben. Die gesamte Messung einer einzigen Probe dauert ca. 50 Min.


In jüngster Zeit wurde ein neuer, einfach zu handhabender Enzymimmunoassay entwickelt und validiert [70]. Dieser Assay erlaubt jedem Labor, welches über ein Mikrotiterplatten-Lesegerät (sog. ELISA-Reader) verfügt, die ADMA-Messung in humanem Serum oder Plasma durchzuführen. Damit ist der für die Messung notwendige Zeit-, Kosten- und Personalaufwand dramatisch gesunken, und der Test steht für den Einsatz in der klinischen Routinediagnostik zur Verfügung.
Dieser patentgeschützte ADMA®-ELISA wurde mittels hochmoderner chemisch-analytischer Verfahren wie der Massenspektrometrie validiert. Die Übereinstimmung der mit der neuen Methode gegenüber etablierten Messverfahren erhaltenen Ergebnisse war außerordentlich gut (im Vergleich zu HPLC: R = 0,997; p < 0.0001; N = 7; im Vergleich zu LC-MS/MS: R = 0,984; p < 0.001; N = 29; Abbildung 20).
Die Kreuzreaktivitäten mit anderen im Plasma vorhandenen Analyten wie Monomethylarginin, SDMA und L-Arginin ist mit 1,0%, 1,2% und <0,02% vernachlässigbar gering. Der ELISA bietet einen linearen Messbereich zwischen 0,1 und 3 µmol/l in Serum- und Plasmaproben und deckt damit den gesamten im menschlichen Serum oder Plasma relevanten Konzentrationsbereich ab. Für experimentelle Anwendungen wurde der ELISA auch unter Verwendung von Plasma der Ratte und der Maus sowie mit Zellkulturüberständen validiert [70].
Mit dem ADMA®-ELISA werden aktuell die ADMA-Konzentrationen in großen Patientenkollektiven aus kontrollierten klinischen Studien bestimmt; eine aktuelle Literaturliste ist auf Anfrage beim Herausgeber erhältlich. Weitere Angaben zum ADMA®-ELISA finden sich unter www.dld-diagnostika.de.
 

Abbildung 20. Korrelationsanalyse zwischen den mit dem ADMA®-ELISA bestimmten ADMA-Serumkonzentrationen im Vergleich zur Messung mittels Gaschromatografie-Massenspektrometrie GC-MS. Die gefundene Korrelation zwischen beiden Methoden ist über den gesamten (patho-) physiologisch relevanten Konzentrationsbereich linear und eng und bestätigt die Validität der Messungen mittels des ADMA®-ELISA.